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Los principios de la mancha blanca /negra occidental

Los principios de la mancha blanca /negra occidental

El western blot es una técnica científica que se utiliza para detectar proteínas en una muestra como sangre o tejido humano. Se utiliza en la detección y confirmación de una serie de condiciones médicas, VIH más notable, EEB (o "enfermedad de las vacas locas") y la enfermedad de Lyme. La técnica rompe la sustancia en proteínas individuales por la longitud, lo que es más fácil de detectar proteínas específicas. La presencia de estas proteínas puede indicar una condición médica.

Terminología

El término "western blot" no es una referencia geográfica como tal. Es un juego de palabras del término "mancha blanca /negra meridional," que implica la detección de ADN y fue nombrada después de su revelador Edwin Southern. Como no es tomado del nombre de una persona, "western blot" normalmente se escribe sin mayúscula w. El nombre más formal para el procedimiento es proteína immunoblot.

Preparación

Esta primera etapa del proceso de inmunoblot es lisis, en el cual se dividen las células en la muestra. Dependiendo del tipo de tejido, esto podría implicar ondas sonicas o utilizando métodos físicos que de alguna manera similar a una licuadora de cocina o un mortero y mortero. El objetivo es hacer accesible el contenido de las celdas. Las células rotas hacia abajo entonces se suspenden en un líquido; la solución resultante se llama un lisado.

Electroforesis

El lisado se coloca en un gel que tiene una carga negativa en un lado. Los investigadores entonces aplicarán una carga positiva hacia el otro lado del gel, haciendo que las proteínas individuales para moverse a través del gel. La resistencia del gel significa que las proteínas más grandes desplazarse más lentamente que las proteínas más pequeñas. El cargo sólo se aplica por un breve momento y eliminado, dejando diferentes tamaño proteínas en diferentes posiciones.

Borrar

Los investigadores luego transfieren las proteínas a una hoja especial de papel, hecha generalmente de nitrocelulosa (conocido comúnmente como papel de flash). Funciona un poco como escoger encima de un parche de polvo con cinta adhesiva. El efecto de la transferencia es mantener las posiciones respectivas de las diferentes proteínas, apenas como usando papel secante en un derrame de tinta "copias a través de" el patrón de la mancha. El papel, con las proteínas, es conocido como la mancha blanca /negra occidental.

Análisis

La etapa final es la clave trata de añadir un anticuerpo, un tipo especial de molécula que corresponde a la proteína específica de los investigadores están buscando y se une a la proteína. Los investigadores añada algo al anticuerpo que puede ser detectado y convertido en un registro visual que muestra la posición y la presencia de los anticuerpos y, por tanto, la proteína. Una técnica común es añadir la enzima al anticuerpo y luego exponer el papel a un sustrato (una colección de moléculas incoloras) que convierte un color específico que reacciona con la enzima. El registro visual debe ser mucho más claro porque todos los ejemplos de la proteína específica que el investigador están buscando (y así los anticuerpos adjuntos) deben ser aproximadamente la misma posición en el western blot.